Com a expansão de São Paulo, impulsionada pelo ciclo do café, as antigas instalações tornaram-se insuficientes, e, por volta de 1870, José Antônio do Rego Freitas e o Barão de Piracicaba doaram o terreno atual, na Vila Buarque. O arquiteto italiano Luiz Pucci projetou o novo hospital em estilo gótico, utilizando tijolos aparentes e alicerces construídos com blocos de pedra assentados por gravidade, sem argamassa, estrutura que resiste sem rachaduras até hoje.
Inaugurado em 31 de agosto de 1884, o hospital foi gradualmente ampliado com pavilhões e clínicas. Inicialmente, as enfermarias de Medicina e Cirurgia mantinham rígida separação entre homens e mulheres, por influência da severa moral imposta pelas religiosas que dirigiram o hospital até 1963.

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